334-774-407
Исследования в свете люминесценции
Метод основан на наблюдении микроскопических объектов с использованием их способности к свечению.
Метод основан на наблюдении микроскопических объектов с использованием их способности к свечению. По сравнению с методами обычной микроскопии исследование в свете люминесценции обладает рядом преимуществ: цветное свечение, высокая степень контрастности светящихся объектов на темном фоне, возможность исследования как прозрачных, так и непрозрачных живых объектов, а также различных жизненных процессов в динамике их развития, обнаружения и установления локализации отдельных микробов и вирусов. В медицинской микробиологии применяют два метода люминесцентной микроскопии: флуорохромирования и флуоресцирующих антител. Фотолюминесценция.
Представляет собой явление свечения объектов, которое возникает в результате поглощения объектом лучистой энергии. Вследствие некоторых причин свет люминесценции обладает большей длиной волны, чем поглощенный (правило Стокса). Поэтому люминесценцию выгодно возбуждать либо ультрафиолетовыми лучами (300—400 нм), либо сине-фиолетовыми. В обоих случаях возникает свечение в цветовой гамме всего (или большей части) видимого спектра.
Этот вид люминесценции носит название наведенной (вторичной) в отличие от первичной — собственной флюоресценции, нередко проявляемой витаминами, многими пигментами, некоторыми жировыми веществами и антибиотиками, встречающимися в живых организмах, некоторыми продуктами нормального и патологического обмена. Флуорохромы.
Красители, не вызывающие сильной окраски объектов в обычном свете, но флуоресцирующие при облучении ультрафиолетовыми лучами. Из синтетических флюорохро-мов наилучшие результаты дают акридин оранжевый, корифосфин, примулин, родамин, ФИТЦ (флюоресцеинизотиоцианат), которые обычно применяют в виде слабых водных растворов.
Основными элементами для получения падающего на объект света возбуждения и условий для наблюдения свечения объекта являются источник света, позволяющий выделить из широкого спектра излучения требуемую длину волны, и система светофильтров. Различается четыре группы светофильтров:светофильтры возбуждения служат для выделения из общего потока излучения источника света тех лучей, которые обеспечат возбуждение и свечение объекта; устанавливаются в ветви осветителя;
запирающий светофильтр служит для срезания света возбуждения и пропускания только света люминесценции; устанавливается в наблюдательной ветви;
сменные фильтры разные по назначению: фильтры для защиты глаз от попадания красных и инфракрасных лучей, а также теплозащитные фильтры; в отечественных микроскопах применяются фильтры из стекла БС8 для предохранения объектов от выцветания;
светоделительная пластина служит для разделения падающего на объект светового потока (направление света от источника через объектив на объект) и светового потока, формирующего изображение (пропускание света, отразившегося от объекта и прошедшего через объектив). Светоделительная пластина обеспечивает необходимое спектральное разделение света возбуждения и света люминесценции: отражает 90% света в спектральной области возбуждения люминесценции (400—550 нм) и пропускает 90% света в спектральной области люминесценции объекта (500—700 нм).
Метод основан на наблюдении микроскопических объектов с использованием их способности к свечению. По сравнению с методами обычной микроскопии исследование в свете люминесценции обладает рядом преимуществ: цветное свечение, высокая степень контрастности светящихся объектов на темном фоне, возможность исследования как прозрачных, так и непрозрачных живых объектов, а также различных жизненных процессов в динамике их развития, обнаружения и установления локализации отдельных микробов и вирусов. В медицинской микробиологии применяют два метода люминесцентной микроскопии: флуорохромирования и флуоресцирующих антител. Фотолюминесценция.
Представляет собой явление свечения объектов, которое возникает в результате поглощения объектом лучистой энергии. Вследствие некоторых причин свет люминесценции обладает большей длиной волны, чем поглощенный (правило Стокса). Поэтому люминесценцию выгодно возбуждать либо ультрафиолетовыми лучами (300—400 нм), либо сине-фиолетовыми. В обоих случаях возникает свечение в цветовой гамме всего (или большей части) видимого спектра.
Этот вид люминесценции носит название наведенной (вторичной) в отличие от первичной — собственной флюоресценции, нередко проявляемой витаминами, многими пигментами, некоторыми жировыми веществами и антибиотиками, встречающимися в живых организмах, некоторыми продуктами нормального и патологического обмена. Флуорохромы.
Красители, не вызывающие сильной окраски объектов в обычном свете, но флуоресцирующие при облучении ультрафиолетовыми лучами. Из синтетических флюорохро-мов наилучшие результаты дают акридин оранжевый, корифосфин, примулин, родамин, ФИТЦ (флюоресцеинизотиоцианат), которые обычно применяют в виде слабых водных растворов.
Основными элементами для получения падающего на объект света возбуждения и условий для наблюдения свечения объекта являются источник света, позволяющий выделить из широкого спектра излучения требуемую длину волны, и система светофильтров. Различается четыре группы светофильтров:
